上海遠慕生物科技有限公司

遠慕新聞:植物組織樣本的前處理方法
點擊次數:740 更新時間:2020-08-03

植物DNA的提取和純化是植物基因工程研究的基礎操作。實施分子標記、基因圖譜、基因指紋圖譜、基因文庫構建、遺傳多態性分析、DNA重組、RAPD(隨機引物多態性DNA)、RFLP(限制性酶多態性)、基因分離及遺傳轉化和鑒定等都以提取DNA為前提。

目前,對從植物組織中提取DNA方法的要求是:簡便、有效、快捷以及經濟。與動物組織相比,植物組織含有較多的多糖和其他次生代謝產物(酚、酯、萜、色素等),這給高質量的DNA提取帶來較多的困難。尤其是多糖成分是影響DNA純度-常見的問題。如何做到既去除這些污染物又能相對保持高的產量,并且能簡捷有效地提純,一直是植物生物技術研究者探索的問題。

對于普通的植物(低酚、低酯、低糖等)如:水稻、白菜、莧菜、南瓜、黃瓜、西紅柿、上海青、菠菜、筍瓜、冬瓜、蓮藕、山藥、竹筍等;我們可以選用普通植物DNA提取試劑盒(磁珠法)試劑

對于多糖、多酚類植物(香蕉、西瓜、蘋果、梨等果肉,紅薯、馬鈴薯等塊莖,棉花、月季、枇杷、益母草、夏枯草等人參、曼陀羅、向天果、射干、桔梗、滿山紅、金雞納霜等藥用植物)可以選用多酚植物DNA提取試劑盒(磁珠法)試劑,針對類似的植物我們經過長期的優化,可以得到較好的實驗結果。

以葉片為例,葉片需先剪碎成小塊,以便放入1.5ml離心管。-佳樣本的長度應在1cm 以下。重量不超過250mg,推薦使用50mg,如果是植物種子粉末可以使用10mg-20mg粉末即可。

一、勻漿介質

一般采用 0.05 mol/L Tris-HCl,pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據樣本及測定方針的狀況自行設定濃度,目的是堅持樣本的等滲環境。

二、組織勻漿的制備

1、取組織塊(0.2g~0.5g)可到 5~10mg 在嚴寒的 PBS 中漂洗,濾紙拭干,稱重,放入 5ml 的勻漿管中。

2、按重量 (g):體積 (ml)=1:4 的比例參與 4 倍體積的勻漿介質于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪趕快剪碎組織塊。  

3、勻漿的方法:手工勻漿,機器勻漿。

① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端刺進盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿筆直刺進套管中,上下轉動研磨數十次(6~8 分鐘),充沛研碎,制成 20% 的勻漿液。

② 機器勻漿:用組織搗碎機 10000~15000 轉 / 分 上下研磨制成 20% 組織勻漿,也可用內切式組織勻漿機制備(勻漿時間 10 秒 / 次,空隙 30 秒,接連 3~5 次,在冰水中進行,可適當延伸勻漿時間),

4、將制備好的 20% 勻漿液用一般離心機或低溫低速離心機 4000 轉 / 分左右,離心 10~15 分鐘,取上清液進行測定.

三、樣本保存

植物組織樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中心如不重復凍融,-20 ℃ 以下可保存三個月,-70 ℃ 以下可保存六個月。 制備好的勻漿液主張不要凍存,當天進行測定,如放置時間過長相關酶活會有所下降,部分方針 4 ℃ 可存放 3~5 天(如 SOD 要存放 2~3 天,MDA 可存放 3~5天,總蛋白測定可存 5~7 天)。

上海遠慕生物科技有限公司 版權所有 地址:上海市嘉定區曹安公路5588號 郵編:201202 電話: 管理登陸
傳真:021-58999639 手機:13310162040 聯系人:俞燕熙 郵箱:m13310162040@163.com  GoogleSitemap 網址:m.planetchoco.com ICP備案號:滬ICP備14029423號-1
主營:ELISA試劑盒/染色液/溶液 /動物血清/標準品/化學試劑
點擊這里給我發消息
手機:13310162040
主站蜘蛛池模板: 国产午夜精华无码网站| 精品无码一区在线观看| 无码一区二区波多野结衣播放搜索 | 最新无码人妻在线不卡| 国产精品无码AV不卡| 国产免费无码一区二区| 亚洲最大天堂无码精品区| 日韩加勒比一本无码精品| 国产成人无码久久久精品一| 18禁成年无码免费网站无遮挡| 国产成人无码一区二区在线观看| 一本一道VS无码中文字幕| 国产亚洲美日韩AV中文字幕无码成人| 久久午夜无码鲁丝片秋霞 | 日韩精品专区AV无码| 午夜精品久久久久久久无码 | 久久无码高潮喷水| 精品久久久久久无码人妻热| 亚洲人成人无码.www石榴| 亚洲一区二区三区AV无码| 国产在线精品无码二区二区| 亚洲熟妇无码一区二区三区导航| 国产精品三级在线观看无码| 国产精品一区二区久久精品无码| 亚洲AV无码之国产精品| 亚洲国产成AV人天堂无码| 无码AV波多野结衣久久| 亚洲av无码精品网站| 亚洲国产AV无码专区亚洲AV| 国内精品无码一区二区三区| 亚洲精品无码AV中文字幕电影网站| 无遮掩无码h成人av动漫| 亚洲av纯肉无码精品动漫| 69久久精品无码一区二区 | 国产成人精品无码一区二区老年人 | 国产成人无码精品一区不卡 | 中文字幕无码中文字幕有码| 人妻丰满熟妇AV无码区乱| 精品一区二区三区无码免费视频 | 亚洲国产精品无码久久九九 | 免费无码AV电影在线观看|