peprotech細胞因子的溶解方法
點擊次數：488 更新時間：2022-05-18
PeproTech細胞因子中不含載體蛋白（Carrier Protein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以最少量的鹽來進行凍干處理，因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后，務必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正常現象）。
1．離心：高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（根據說明書要求進行選擇）溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL，如10ug的產品，需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩，避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當的溶劑輕搖并靜置一段時間，待細胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇：
1）要求用去離子水溶解的產品，務必不可用鹽溶液，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出；
2) 要求用鹽溶液溶解的產品，請依照說明書上的濃度，同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
3．分裝和貯存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根據自己的實驗需要進一步稀釋成工作液，稀釋可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液，其中最好含有5-10%的FCS （小牛或胎牛血清）或0.5 %的BSA（牛血清白蛋白）來穩定蛋白。工作液在4℃可保存1周，如需長期保存，則需分裝凍存于-20℃ （注意：不可凍存于-80℃）。分裝時每管中工作液的體積最好是一次實驗的用量，以實現每次實驗用完一只工作液，避免反復凍融引起蛋白活性的降低。
