培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物實(shí)驗室檢測工作的基礎(chǔ)，事關(guān)檢測工作的準(zhǔn)確性、可靠性，在微生物實(shí)驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環(huán)節(jié)的質(zhì)量問題，都將導(dǎo)致檢驗結(jié)果科學(xué)性、客觀性的偏離。因此，加強(qiáng)培養(yǎng)基的實(shí)驗室質(zhì)量控制，認(rèn)真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作，不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平，才能為微生物檢測實(shí)驗室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基的制備流程
1.培養(yǎng)基用水
培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。
2.稱量
稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果；干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。干粉培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按照生產(chǎn)商提供的有關(guān)說明準(zhǔn)確配制。
3.復(fù)水
復(fù)水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長；容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出；含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘；加熱培養(yǎng)基時一定要進(jìn)行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進(jìn)行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進(jìn)行再融化時應(yīng)使用沸水浴或流動蒸汽進(jìn)行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。
4.滅菌
培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中.規(guī)定的條件及時進(jìn)行滅菌，通常是121℃.15.min，以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國家標(biāo)準(zhǔn)或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，還會使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進(jìn)行驗證。
5.pH測定
微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。滅菌前后PH會有所變化，所以滅菌前就要準(zhǔn)備好，可以用1mol/L.Na0H或.lmol/L.HCL調(diào)整，注意不可反復(fù)調(diào)pH，否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。
6.配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所以建議平板傾注后立即使用。保存時,盡可能貯存在不會改變其成分的條件下，即避光或在4.℃.~.12℃冰箱密閉保存。如果保存時間超過2d,應(yīng)將其放人密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期,應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其他密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。
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