實驗方法原理 | 彈力纖維由隨機交聯(lián)盤繞的一些肽鏈組成，含有豐富的二硫鍵糖蛋白成分，所以可稱為彈性蛋白。易與染色液中堿基結(jié)合，為了能夠更好地顯示彈力纖維和膠原纖維成分，選用維多利亞藍(lán)、麗春紅和ku味酸組合雙重染色方法。 |
實驗材料 | 石蠟組織切片 |
試劑、試劑盒 | 維多利亞藍(lán) 糊精 間ben二酚 蒸餾水 乙醇 三氯化鐵水溶液 濃鹽酸 ben酚二甲苯 中性樹膠 |
儀器、耗材 | 60 ℃恒溫箱 濾紙 |
實驗步驟 | 維多利亞藍(lán)染色液：維多利亞藍(lán)（Victoria blue）2 g，糊精 0.5 g，間ben二酚 4 g，蒸餾水 200 ml。將上述物質(zhì)混合后加熱煮沸，邊煮邊攪拌，約 5min。然后用另一容器取 30％ 三氯化鐵水溶液 25 ml，另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中，繼續(xù)煮沸 3 min，不斷攪拌溶液呈膠凍狀。去火，冷卻過濾，將濾紙上的殘渣連同濾紙一起放在 60℃ 恒溫箱中烤干。殘渣呈深藍(lán)色細(xì)顆粒狀粉末，再將其溶于 400 ml 的 70％ 乙醇液中。然后加濃鹽酸 4 ml 和苯ben酚 5 g，放置至成熟后使用。
1. 石蠟組織切片，常規(guī)脫蠟至水。
2. 切片入 70％ 乙醇中洗 2 min。
3. 將切片浸入盛有維多利亞藍(lán)液中染 2～5 h。
4. 直接入 95％ 乙醇中分色數(shù)秒鐘。
5. 用蒸餾水洗 2 min。
6. 用麗春紅-ku味酸染色液滴染切片 3 min。
7. 直接用無水乙醇沖洗多余染色液 2 次。
8. 二甲苯透明和中性樹膠封固。 |
注意事項 |
1. 維多利亞藍(lán)染色液可在室溫中存放較長時間，染色液浸染后倒回原處，可反復(fù)使用。
2. 95％ 乙醇分色后，立即浸入水中，可用顯微鏡觀察染色程度，如果較淺或較深，可再重復(fù)染色或分色。 |
其他 | 結(jié)果：彈力纖維呈藍(lán)綠色，膠原纖維呈紅色，背景呈黃色。 |
